Células Madre mesenquimatosas endometriales aisladas de la lesión menstrual reparada con epirubicina en las células de la granulosa ovárica humana mediante la inhibición de la expresión de Gadd45b en la vía del ciclo celular

Células madre mesenquimatosas endometriales aisladas de la lesión menstrual reparada con epirubicina en las células de la granulosa ovárica humana mediante la inhibición de la expresión de Gadd45b en la vía del ciclo celular

Para explorar el efecto de las células madre mesenquimáticas aisladas de la sangre menstrual (MB-MSC) sobre el daño inducido por epirubicina a las células de la granulosa ovárica (GCs) humana y sus mecanismos potenciales.

Métodos

Los niveles de estradiol, progesterona, hormona anti-Mülleriana, inhibina A e inhibina B se determinaron utilizando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. La proliferación de GC se detectó mediante los ensayos del kit de recuento de células 8. La distribución del ciclo celular se detectó mediante tinción única con yoduro de propidio. La apoptosis de GCs se determinó utilizando la tinción doble con anexina V y 7-AAD. Los genes expresados ​​diferencialmente de GCs se analizaron con el chip genético Affymetrix Human Transcriptome Array 2.0 y se verificaron con análisis de transferencia Western.

Resultados

La epirrubicina inhibió la secreción de estradiol, progesterona, hormona anti-Mülleriana, inhibina A e inhibina B y la proliferación de GCs; arrestado estos GC en la fase G2 / M; y promovió la apoptosis de los GC. Sin embargo, los MB-MSC repararon el daño inducido por epirubicina a los GC. Los genes expresados ​​diferencialmente de GCs, Gadd45b, CyclinB1 y CDC2, se encontraron mediante análisis de microarrays y bioinformática. Western blot mostró que la epirubicina incrementaba la expresión de la proteína Gadd45b y la expresión de las proteínas CyclinB1 y CDC2, mientras que las MB-MSC regulaban la expresión de la proteína Gadd45b y la expresión de la proteína CyclinB1 y CDC2.

Conclusiones

Los MB-MSC repararon el daño inducido por epirubicina a los GCs, que podría estar relacionado con la inhibición de la expresión de la proteína Gadd45b.

Fondo

La epirubicina se ha convertido en el tratamiento de primera línea para una variedad de cánceres, como el cáncer de mama, la leucemia y el linfoma, debido a su actividad anticancerígena de amplio espectro, alta especificidad y baja toxicidad cardíaca. La administración a largo plazo de altas dosis de quimioterapia puede causar daño ovárico en pacientes en edad fértil, lo que resulta en una reducción de la función ovárica, la amenorrea y, finalmente, la insuficiencia ovárica prematura (FOP). Se informó que aproximadamente el 68% de los sobrevivientes de cáncer de mama que recibieron quimioterapia se quejaron de más síntomas físicos y menopáusicos que sus homólogos sanos, y algunos pacientes incluso tuvieron una reserva ovárica y un potencial reproductivo reducidos [1]. La FOP inducida por quimioterapia no solo tiene un efecto perjudicial sobre la función gonadal femenina, sino que también aumenta el riesgo de una variedad de enfermedades como las enfermedades cardiovasculares, la osteoporosis y los trastornos cognitivos [2, 3, 4, 5]. Estudios recientes han demostrado que la antraciclina, como la epirubicina, puede causar apoptosis de las células de la granulosa ovárica (GC) y daño folicular, lo que resulta en una reducción de la función ovárica y, finalmente, en el desarrollo de POF [6, 7]. Por lo tanto, se deben hacer intentos para prevenir o mejorar el daño ovárico inducido por la quimioterapia.

La terapia con células madre ha surgido como un tratamiento prometedor para reparar tejidos y funciones dañados [8, 9]. Se ha informado que el trasplante de células madre mesenquimales (MSC) aisladas de médula ósea, grasa o cordón umbilical puede inhibir la apoptosis de GC, mejorar la función ovárica y reparar el daño de la estructura ovárica en ratones a través de vías paracrinas [10, 11, 12] . Meng et al. [13] aislaron una población de células similares a MSC de la sangre menstrual (MB) de una mujer sana. Estos MB-MSC tienen un alto potencial proliferativo, un potencial de auto-renovación y un potencial de diferenciación múltiple, y también tienen muchas ventajas sobre las células madre derivadas de otras fuentes, como la facilidad de recolección, seguro y no invasivo, sin preocupaciones éticas ni autoinmunes. rechazo [14]. En este estudio, se aislaron MB-MSC de tres voluntarias sanas utilizando el método adherente, y se investigaron sus efectos sobre el daño inducido por epirubicina a los GC ováricos humanos, así como sus mecanismos potenciales.

Métodos

Aislamiento, cultivo e identificación de MB-MSC.

Este estudio fue aprobado por el comité de ética de la Universidad de Medicina de Tianjin y se obtuvo un consentimiento informado por escrito de cada donante. Las MB-MSC se aislaron e identificaron por adherencia como se describió anteriormente. Brevemente, se recolectó MB de tres hembras sanas de 25 a 35 años de edad, todas las cuales tenían ciclos menstruales normales sin enfermedades transmitidas, como hepatitis B, hepatitis C, sífilis y síndrome de inmunodeficiencia adquirida.

Fuente

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